• page_banner

Notícies

Javascript està actualment desactivat al vostre navegador.Algunes funcions d'aquest lloc web no funcionaran si JavaScript està desactivat.
Registreu-vos amb les vostres dades específiques i el medicament específic d'interès, i relacionarem la informació que proporcioneu amb els articles de la nostra àmplia base de dades i us enviarem una còpia en PDF immediatament.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departament de Malalties Infeccioses, Primer Hospital Afiliat de la Universitat de Suzhou, Ciutat de Suzhou, Província de Jiangsu, 215000 Tel.tumors del sistema digestiu amb una supervivència global a 5 anys del 14,1%.Molts pacients amb HCC es diagnostiquen en una fase avançada, de manera que el cribratge precoç és essencial per reduir la mortalitat per HCC.A més dels indicadors de detecció d'ús habitual com l'alfa-fetoproteïna sèrica (AFP), l'alfa-fetoproteïna reactiva a la lectina de la lent (AFP-L3) i la protrombina anormal (proteïna induïda per deficiència de vitamina K II, PIVKA-II), tècniques de biòpsia de líquids. S'ha demostrat que té un valor diagnòstic en la detecció d'HCC.En comparació amb els procediments invasius, la biòpsia de líquids pot detectar metabòlits malignes circulants.Les tècniques de biòpsia de fluids detecten cèl·lules tumorals circulants, ADN del tumor circulant, ARN circulant i exosomes i s'utilitzen per a la detecció, el diagnòstic i l'avaluació precoç de l'HCC.Aquest article revisa la biologia molecular i l'aplicació de diverses tècniques de biòpsia de fluids per aïllar biomarcadors prometedors que poden ser opcions viables per a l'avaluació precoç de l'HCC per millorar el cribratge precoç dels grups d'HCC d'alt risc.Paraules clau: tècnica de biòpsia líquida, carcinoma hepatocel·lular, grup d'alt risc.
El carcinoma hepatocel·lular (HCC) és un tumor maligne comú del tracte digestiu, ocupa el sisè lloc entre els nous casos de tumors malignes tant en homes com en dones.1 A tot el món, el càncer de fetge és la tercera causa de mort per càncer després del càncer de pulmó i colorrectal, i representa el 8,3% de les morts relacionades amb el càncer per totes les neoplàsies malignes.1 El pronòstic de l'HCC està estretament relacionat amb l'estadi del diagnòstic.Les principals raons de la mala supervivència en l'HCC són les metàstasis intrahepàtiques, els trombis del tumor venós portal i les metàstasis distants que impedeixen la resecció, i moltes d'aquestes característiques ja estan presents en els pacients en el moment del diagnòstic.
D'acord amb les directrius de diagnòstic i tractament, els principals factors de risc per desenvolupar HCC són la cirrosi hepàtica, la infecció per virus de l'hepatitis B crònica (VHB) o virus de l'hepatitis C (VHC), la malaltia del fetge gras alcohòlic i la malaltia del fetge gras no alcohòlic (NAFLD). ).2 A més, els factors de risc d'HCC inclouen la ingesta d'aliments contaminats amb aflatoxines, esquistosomiasi, altres causes de cirrosi, antecedents familiars de càncer de fetge, diabetis, obesitat, tabaquisme i lesions hepàtiques induïdes per fàrmacs.Els grups d'alt risc de 35 i 45 anys haurien de fer-se revisions mèdiques periòdiques.El cribratge precoç és una estratègia de tractament primerenca important per millorar la supervivència global dels pacients amb HCC.
Es recomanen biomarcadors com AFP, AFP-L3 i PIVKA-II per al cribratge precoç de HCC3,4.Les tècniques de biòpsia líquida han mostrat resultats prometedors en el diagnòstic precoç i l'avaluació del tractament.5,6 S'han fet avenços significatius en la biòpsia líquida d'HCC, que pot tenir una sensibilitat i especificitat més alta que els marcadors sèrics d'ús habitual com l'AFP (taula 1).
L'AFP és un biomarcador àmpliament utilitzat en l'HCC i actualment és el biomarcador més detallat àmpliament utilitzat per a la detecció precoç, el diagnòstic i l'avaluació de la malaltia.Un nivell d'AFP persistentment elevat es considera un factor de risc per a la progressió de l'HCC.7,8 La taxa de detecció del carcinoma hepatocel·lular petit (sHCC) està augmentant amb el desenvolupament de l'ecografia i la tomografia computada, i s'ha trobat que l'AFP és especialment insensible a la detecció d'hHCC en la pràctica clínica.Segons un estudi multicèntric retrospectiu9, es va trobar AFP positiva en el 46% (616/1338) dels casos d'HCC i en el 23,4% (150/641) dels casos d'HCC.A més, els nivells d'AFP són elevats en pacients amb malaltia hepàtica crònica i cirrosi.10 Així, l'AFP té un efecte de cribratge limitat per a sHCC.11 Segons les Guies de pràctica clínica d'Àsia-Pacífic per al carcinoma hepatocel·lular, no es recomana l'ús d'AFP.12 L'evidència clínica suggereix que PIVKA-II és superior a l'AFP en el tractament de l'HCC i que la combinació de PIVKA-II i AFP ha un valor diagnòstic més alt en HCC.13 En comparació amb la biòpsia de teixit, la biòpsia de líquid detecta principalment metabòlits associats al tumor en fluids corporals (sang, saliva, líquid pleural, líquid cefaloraquidi o orina) i és menys invasiva per als teixits.14 A més, les biòpsies líquides poden reflectir característiques malignes no presents al teixit tumoral primari.15 Les biòpsies líquides encara no s'estan provant a la pràctica clínica per a tot tipus de tumors, però el seu potencial diagnòstic en càncer està cridant l'atenció dels oncòlegs.16 La biòpsia de líquids pot detectar cèl·lules tumorals circulants (CTC), ADN tumoral circulant (ADNc), ARN lliure circulant (ARNc) i exosomes.En aquest article, parlarem de les característiques, el paper i l'aplicació de diverses tècniques de biòpsia de fluids en el cribratge precoç de grups d'HCC d'alt risc.
L'ADN extracel·lular (cfDNA) en mostres de sang d'individus sans va ser descrit per primera vegada el 1948 per Mandel et al.17 cfDNA és un fragment d'ADN lliure de cèl·lules d'aproximadament 160-180 pb de longitud, originat principalment a partir de limfòcits i cèl·lules mieloides.L'ADNc és un fragment d'ADN mutant específic alliberat per cèl·lules tumorals a la sang perifèrica, que representa la informació genòmica de les cèl·lules tumorals després de determinats processos fisiopatològics, com ara la necrosi, l'apoptosi i l'excreció.La proporció d'ADNc en l'ADNc total varia àmpliament amb el tipus de tumor, i els fragments d'ADNc solen tenir una longitud inferior a 167 pb.18 L'estudi de Underhill va demostrar que els fragments d'ADNc són generalment més curts que l'ADNc normal.19 En comparació amb els individus sans, la longitud total dels fragments d'ADNc a la sang dels pacients amb càncer és més curta, de manera que l'ADNc es pot utilitzar com a indicador del cribratge precoç del tumor.L'enriquiment de certs subconjunts de longituds de fragments d'ADNc pot millorar la detecció d'ADNc associat a tumors sòlids no metastàtics.Els estudis han demostrat que l'ADNc es troba en més del 75% dels càncers avançats de pàncrees, còlon, bufeta, gastrointestinal, fetge, ovari, mama, melanoma i cap i coll.20,21 No obstant això, la quantitat d'ADNc a la sang depèn de la ubicació del tumor.22 En un estudi de Bettegoud, es va trobar que els pacients amb càncer colorectal, de mama, de fetge, de pulmó i de pròstata tenien nivells més alts d'ADNc a la sang que altres càncers.En canvi, en pacients amb càncer oral, càncer de pàncrees, càncer gàstric i glioma, la concentració d'ADNc a la sang era menor.vint-i-u
Com que l'ADNc conté les mateixes mutacions genètiques que les cèl·lules tumorals primàries, l'ADNc es pot utilitzar per detectar mutacions heterogènies específiques del tumor i canvis epigenètics, incloent la metilació, la hidroximetilació, les variacions d'un sol nucleòtid i les variacions del nombre de còpies.vint-i-tres
La metilació de l'ADN és un dels canvis epigenètics més comuns que provoca la repressió gènica.En comparació amb les cèl·lules normals, hi ha diferències en el nivell general de metilació del genoma de la cèl·lula tumoral, especialment en la metilació dels gens supressors de tumors, que es poden detectar en una fase primerenca, cosa que suggereix que els canvis en la metilació de l'ADN poden ser un indicador de les precoces. detecció de tumorigènesi.Els gens supressors de tumors associats amb HCC es poden inactivar mitjançant la metilació del promotor, estimulant així la tumorigènesi.24 La metilació de l'ADN és un marcador ideal per al diagnòstic precoç de tumors a causa de la seva especificitat tissular, detectabilitat i independència de l'edat.A més, la metilació de l'ADN és més freqüent en comparació amb les mutacions somàtiques perquè hi ha més regions diana i diversos llocs CpG alterats a cada regió del genoma diana.25 A més de múltiples llocs CpG, s'han identificat un gran nombre de loci hipermetilats independents a l'ADNc a DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 i RGS10.26 Xu et al.La comparació de mostres d'ADNc de 1098 pacients amb HCC i 835 controls sans es va trobar que els gens associats amb l'HCC es correlacionen fortament amb les signatures de metilació de l'ADNc del plasma corresponents.25 A partir de l'anàlisi de laboratori, es va desenvolupar un model predictiu que conté 10 marcadors de metilació amb una sensibilitat i especificitat del 85,7% i del 94,3%, respectivament, i aquests marcadors estaven altament correlacionats amb la massa tumoral, l'estadi del tumor i la resposta al tractament.Aquests resultats indiquen que l'ús de marcadors de metilació de l'ADNc és molt prometedor en el diagnòstic, el seguiment i el pronòstic de l'HCC.En un model de metilació que consta de tres gens metilats de manera aberrant (APC, COX2, RASSF1A) i un miRNA (miR203) presentat per Lu et al27, la sensibilitat i l'especificitat del model 27 per diagnosticar l'HCC associat al VHB eren comparables.80%.A més, el model podria detectar el 75% dels pacients amb HCC no diagnosticats amb un nivell d'AFP de 20 ng/mL.El gen de la proteïna 1A de la família de dominis associats a Ras (RASSF1A) és la principal seqüència d'ADN repetitiva del genoma humà.Araujo et al.va concloure que la hipermetilació del promotor RASSF1A podria ser un biomarcador valuós per al cribratge precoç de l'HCC i un potencial objectiu molecular per a la teràpia epigenètica.28 En un estudi, es va trobar hipermetilació sèrica del promotor RASSF1A en el 73,3% dels pacients amb HCC.29 L'element 1 de nucleòtids llargs intercalats (LINE-1) és un altre mediador de retrotransposició molt actiu.La hipometilació de LINE-1 es va trobar a l'ADN del 66,7% de les mostres de sèrum de HCC i es va associar amb una recurrència precoç i una mala supervivència després de la resecció radical.29 La hipermetilació és un procés genètic comú que té un paper únic en el desenvolupament de la cirrosi hepàtica i l'HCC.30 En canvi, la hidroximetilació és un procés de desmetilació que indueix la reactivació i l'expressió gènica, i la detecció del producte 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) en aquest procés es pot utilitzar per identificar un tumor.La metilació i la hidroximetilació de l'ADNc s'associen amb la tumorigènesi i poden contribuir al cribratge precoç de l'HCC.En un estudi de 2554 subjectes, es van trobar 31 5-hmC a tot el genoma en mostres d'ADNc i 32 gens es van identificar comparant seqüències de 5-hmC en pacients amb HCC i grups d'alt risc com aquells amb malalties cròniques.Models de diagnòstic de malalties hepàtiques.i cirrosi.Aquest model era superior a l'AFP per distingir l'HCC del teixit no tumoral.
Les mutacions a les regions codificants poden conduir a anomalies transcripcionals, que poden provocar canvis en les seqüències de proteïnes i, finalment, a càncer.Les variants d'un sol nucleòtid són marcadors genòmics importants per al cribratge precoç del tumor a causa de la seva alta fiabilitat dels teixits i l'alta especificitat del tumor i el teixit.Nombrosos estudis relacionats amb l'HCC que utilitzen la seqüenciació de nova generació (NGS) per a la seqüenciació de l'exoma i del genoma sencer del càncer han identificat gens cel·lulars mutats comuns com TP53 i CTNNB1, així com diversos, inclosos ARID1A, MLL, IRF2.Els nous gens, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 i JAK1 mostren taxes de mutació moderades. L'anàlisi de la funció del gen mutant suggereix que les alteracions en la remodelació de la cromatina, la transducció del senyal Wnt/β-catenina i JAK/STAT, la via del cicle cel·lular P53, modificadors epigenètics, vies d'estrès oxidatiu, la via PI3K/AKT/MTOR i la via RAS/RAF/ La via MAPK cinasa té un paper crucial en l'oncogènesi de l'HCC.32,33 En un estudi en què es van detectar mutacions associades al tumor, Huang et al van trobar que la freqüència de mutacions associades al tumor depenent de l'ADNc era del 19,5% i l'especificitat era del 90% .34 A més, els pacients que van experimentar una invasió vascular eren més propensos a tenir mutacions d'ADNc (P=0,041) i una supervivència sense recurrència més curta (P<0,001). L'anàlisi de la funció del gen mutant suggereix que les alteracions en la remodelació de la cromatina, la transducció del senyal Wnt/β-catenina i JAK/STAT, la via del cicle cel·lular P53, modificadors epigenètics, vies d'estrès oxidatiu, la via PI3K/AKT/MTOR i la via RAS/RAF/ La via MAPK cinasa té un paper crucial en l'oncogènesi de l'HCC.32,33 En un estudi en què es van detectar mutacions associades al tumor, Huang et al van trobar que la freqüència de mutacions associades al tumor depenent de l'ADNc era del 19,5% i l'especificitat era del 90% .34 A més, els pacients que van experimentar una invasió vascular eren més propensos a tenir mutacions d'ADNc (P=0,041) i una supervivència sense recurrència més curta (P<0,001).L'anàlisi de la funció del gen mutant suggereix que els canvis en la remodelació de la cromatina, la senyalització Wnt/β-catenina i JAK/STAT, la via del cicle cel·lular P53, els modificadors epigenètics, les vies de l'estrès oxidatiu, la via PI3K/AKT/MTOR i la via RAS/RAF/MAPK quinasa. un paper crític en la tumorigènesi de l'HCC.32,33 En un estudi que va trobar mutacions associades al tumor, Huang et al.va trobar que la freqüència de mutacions associades al tumor depenent de l'ADNc era del 19,5% i l'especificitat era del 90%..34 к кре того, у пциентов с с сосудистой инвазией чаще встечачачас м мтцц ццс кз кс кс кс к к к к к к к к и и б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б б per 3. .34 A més, els pacients amb invasió vascular tenien més mutacions d'ADNc (P=0,041) i una supervivència lliure de malaltia més curta (P<0,001).L'anàlisi funcional dels gens mutants va revelar la remodelació de la cromatina, la senyalització Wnt/β-catenina i JAK/STAT, la via del cicle cel·lular P53, modificadors epigenètics, la via de l'estrès oxidatiu, la via PI3K/AKT/MTOR i la via RAS/RAF/MAPK. La via de la cinasa té un paper crític en l'oncogènesi de l'HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 , Huang 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 ctDNA 的 频率 为 19,5% , 为 为 90% .34 此外 经历 经历 血管 血管 侵犯 的 患者 有 可能 发生 发生 ctDNA突变(P=0,041)和更短的无复发生存期(P<0,001)。 32,33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 , huang 等 发现 肿瘤 突变 依赖于 依赖于 ctDNA 的 为 为 为 19,5% , 特异性 为 90% .34 此外 血管 侵犯 的 更 更 可能 可能 发生 cTDNA 突变 (P = 0,041 和 更 更短的无复发生存期(P<0,001)。32,33 En un estudi que va trobar mutacions associades al tumor, Huang et al.va trobar que les mutacions associades al tumor depenien en un 19,5% de l'ADNc amb una especificitat del 90% 34. A més, els pacients que havien patit una invasió vascular tenien més probabilitats de desenvolupar ADNc.мутация (P = 0,041) i более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutació (P=0,041) i una supervivència lliure de malaltia més curta (P<0,001).Un altre gen comú conductor de l'HCC és TP53, que té una taxa de mutació superior al 30%.Els estudis han demostrat que la freqüència de mutacions de TP53 en l'ADNc a la sang i l'orina oscil·la entre el 5% i el 60%.35 L'estudi de Johan va demostrar que l'espectre de mutació de l'ADNc en l'HCC tardà té una taxa de mutació similar a l'HCC precoç, incloent el promotor TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutacions en AXIN1 ., ARID2, KMT2D i TSC2 (6% cadascun).36 L'oncogen β-catenina (CTNNB1) té un paper important en la via de senyalització Wnt.El coactivador de transcripció CTNNB1 pot promoure l'expressió gènica, que pot provocar la proliferació cel·lular, la inhibició de l'apoptosi i l'angiogènesi.CTNNB1 també pot interactuar amb TERT per induir la transformació d'hepatòcits.33 El promotor TERT està sovint mutat en alguns tumors sòlids.Les alteracions en TERT, un dels canvis genètics més primerencs en la transformació maligna de l'HCC, poden conduir a la reactivació de la telomerasa en hepatòcits cirròtics i poden promoure la proliferació i prevenir l'envelliment.S'ha informat que es produeixen mutacions en el promotor 33-37 TERT en el 59-90% dels pacients amb nòduls hepàtics proliferatius i HCC precoç i s'associen amb la supervivència.38
Els canvis de nombre de còpies (CNA) són un subtipus important de mutacions somàtiques.La investigació ha demostrat que la càrrega generalitzada i focal del CNA és una signatura genòmica capaç de predir la infiltració immune i l'exclusió del tumor en alguns tipus de càncer.39 Senyalització activa d'infiltració, alta activitat citolítica, inflamació severa i marcadors genètics associats a la presentació d'antigen en HCC.L'anàlisi de la matriu de dades de polimorfismes d'un sol nucleòtid en 477 subjectes va revelar una baixa càrrega al SNC.En canvi, els tumors cromosòmicament inestables amb una alta càrrega extensa de CNA van mostrar signes de rebuig immunitari i es van associar amb la proliferació, la reparació de l'ADN i la disfunció de TP53.Xu et al.va demostrar que el grup HCC tenia puntuacions CNA més altes que el grup de malaltia hepàtica crònica.40 Mitjançant la seqüenciació del genoma sencer d'una sola cèl·lula, es va trobar que els CNA apareixien a l'hora de l'hepatocarcinogènesi i es mantenen relativament estables durant la progressió del tumor.41 Chung et al.va trobar que els nivells de cfDNA estaven significativament elevats en pacients amb HCC i que els CNA a tot el genoma en cfDNA eren un important marcador pronòstic independent en pacients amb HCC tractats amb sorafenib.42 Els pacients amb una càrrega de CNA més alta eren més propensos a patir progressió de la malaltia i mort que aquells amb una càrrega de CNA més baixa.Ollerich et al.va trobar que l'índex d'inestabilitat del nombre de còpies (CNI) es pot utilitzar per avaluar el CNA en l'ADNc de pacients amb càncer.Van assenyalar que els pacients amb càncer avançat tenien puntuacions de CNI significativament més altes que un grup de control, que avalua la resposta del pacient a la quimioteràpia i la immunoteràpia sistèmiques.43 Aquests resultats suggereixen que els CNA trobats en mostres de biòpsia líquida poden servir com a indicadors pronòstics en pacients amb càncer avançat.HCC en el rerefons de la teràpia sistèmica.
Actualment, els mètodes utilitzats per detectar l'ADNc es poden dividir en mètodes dirigits i no dirigits.Breument, els mètodes dirigits com la reacció en cadena de la polimerasa digital (dPCR), la PCR digital BEAMing, el sistema de mutació refractària d'amplificació-PCR, Capp-Seq i Tam-Seq són molt sensibles als gens predefinits.Els mètodes fora de l'objectiu, com ara la seqüenciació del genoma sencer i NGS, proporcionen una visió completa de tot el paisatge genòmic.44 En comparació amb els panells objectiu, la seqüenciació del genoma complet pot detectar no només mutacions puntuals i insercions, sinó també reordenacions i variacions del nombre de còpies.pronòstic, i CTC i cfDNA són bons indicadors que es poden utilitzar per al seguiment dinàmic de l'HCC.45 A més, l'anàlisi d'ADNc pot ser més útil per detectar HCC.Yan et al.va demostrar que l'ADNc en el plasma de pacients amb HCC era significativament més gran que en pacients amb fibrosi hepàtica i controls sans.En comparació amb l'AFP, s'espera que l'ADNc sigui un millor marcador de cribratge per a l'HCC precoç.46 En un estudi prospectiu de 47 biòpsies líquides que van provar l'ADNc i la proteïna en una població poblacional, es va demostrar que eren efectives per diferenciar pacients amb HCC dels pacients sense HCC.En un seguiment de 331 pacients amb ultrasons normals i AFP negatius, la sensibilitat i l'especificitat de l'ADNc per diagnosticar l'HCC van ser del 100% i del 94%, respectivament, de manera que l'ADNc podria detectar HCC en individus seropositius HBsAg asimptomàtics.En l'estudi Yeo48, es va trobar una alta freqüència (92,5%) d'hipermetilació del promotor RASSF1A en pacients amb HCC.A més, Xu et al.va crear un model de diagnòstic per predir l'HCC mitjançant un panell de marcadors de metilació específics amb una especificitat i sensibilitat del 90,5% i del 83,3%, respectivament.El panell permet distingir els pacients amb HCC dels pacients amb altres malalties hepàtiques, cosa que és millor que l'AFP.També van trobar que els controls normals que van resultar positius poden tenir factors de risc per a HCC, com ara la infecció per VHB o un historial de consum d'alcohol.25 Presentem la hipòtesi que els factors d'alt risc per a HCC poden promoure la hipermetilació de l'ADNc, que després contribueix a la progressió de l'HCC i, per tant, l'ADNc pot tenir un paper clau en la detecció de grups d'alt risc.Cai et al.resumeix la gamma completa de mutacions d'ADNc i ofereix una estratègia sòlida per avaluar la càrrega tumoral en pacients.49 Aquesta estratègia pot identificar la tumorigènesi una mitjana de 4,6 mesos abans del canvi d'imatge i ha mostrat un rendiment diagnòstic superior en comparació amb els biomarcadors sèrics AFP, AFP-L3 i PIVKA-II.El valor diagnòstic de les proves d'ADNc s'ha demostrat quan l'avaluació d'imatges no està disponible, de manera que les proves d'ADNc són útils en el diagnòstic d'HCC precoç en grups d'alt risc.Recentment, els científics van utilitzar la tecnologia NGS per analitzar indicadors de variació genètica multivariant (incloent 5-hidroximetilcitosina, motiu 5′, fragmentació, traça de nucleosomes, HIFI) en 3204 mostres clíniques i ADNc.50 Els models HIFI revalidats amb tres conjunts de trens, proves i proves independents van mostrar una discriminació estable i fiable entre les poblacions d'HCC i no HCC amb una sensibilitat del 95,79% i el 95,42% en conjunts de proves i proves específics per a HCC, respectivament.Els sexes eren el 95,00% i el 97,83%, respectivament.El valor diagnòstic del mètode HIFI és superior al de l'AFP per distingir l'HCC de la cirrosi.A més, l'ADNc també s'utilitza en el tractament quirúrgic.Atsushi et al.va determinar els nivells sèrics preoperatoris d'ADNc en pacients amb HCC i va trobar que la taxa de recurrència i la taxa de metàstasi extrahepàtica en el grup d'ADNc positiu eren significativament més altes que en el grup d'ADNc negatiu, i els nivells d'ADNc estaven significativament correlacionats.amb progressió tumoral.51 En ser un biomarcador altament sensible, l'ADNc pot predir la capacitat de l'HCC per envair els vasos.Wang et al.va realitzar la seqüenciació del genoma sencer de 46 pacients amb HCC, i l'anàlisi multivariant va mostrar que el valor llindar de la freqüència al·lel de la variant d'ADNc per a la invasió a microvasos és del 0,83%, la sensibilitat del 89,7% i l'especificitat del 80,0%.un factor de risc independent per a la invasió microvascular en HCC resecable, cosa que suggereix que l'ADNc pot ajudar a guiar el tractament òptim.En conclusió, l'ADNc està totalment implicat en l'aparició i desenvolupament de l'HCC i es pot utilitzar per a la detecció precoç, l'avaluació quirúrgica i el seguiment de la malaltia.
Les CTC són cèl·lules malignes derivades de tumors primaris o metàstasis que fan metàstasi al torrent sanguini.Les cèl·lules tumorals segreguen metaloproteinases de la matriu (MMP), que trenquen la membrana basal, permetent que les cèl·lules tumorals entrin directament als vasos sanguinis i limfàtics.Tanmateix, la majoria de CTC s'eliminen ràpidament per anoikis, atacs immunitaris o tensió de cisalla.53 La transició epitelial-mesenquimal (EMT) permet aïllar fàcilment els CTC del teixit tumoral primari, envair capil·lars i adquirir una supervivència, metàstasi, invasivitat i resistència als fàrmacs significativament millorades.Els estudis han demostrat que hi ha una profunda heterogeneïtat entre les diferents cèl·lules tumorals dels tumors metastàtics primaris.Així, l'anàlisi CTC pot conduir a una comprensió completa de l'heterogeneïtat de les cèl·lules tumorals.54
Els marcadors específics per a CTC associats a HCC inclouen glipican-3 (GPC3), receptor asialoglicoproteïna (ASGPR), molècula d'adhesió de cèl·lules epitelials (EpCAM) i marcadors associats a cèl·lules mare com CD44, CD90, 55 i molècula d'adhesió intercel·lular 1 (ICAM1).) .56 El marcador GPC3 és una proteïna ancorada a la membrana cel·lular que s'utilitza clínicament per a l'anàlisi patològic i la caracterització de l'HCC.57 L'expressió de GPC3 és més freqüent en cèl·lules tumorals d'HCC amb diferenciació intermèdia i baixa i afavoreix la migració extrahepàtica;a més, la presència de CTC GPC3+ indica HCC metastàtic.58 ASGPR és una proteïna transmembrana expressada només a la superfície dels hepatòcits i està altament expressada en HCC ben diferenciat.EpCAM és una de les proteïnes associades a la membrana més utilitzades per capturar CTC.EpCAM s'ha identificat com un marcador de superfície de cèl·lules HCC amb característiques de cèl·lules mare,59 que es correlaciona amb diverses característiques clinicopatològiques de l'HCC, com ara la invasió vascular, els nivells d'AFP avaluats i l'estadi avançat del càncer de fetge a l'Hospital de Barcelona (BCLC).El fenotip 60 CTC EMT és altament metastàtic.54 processos EMT al CTC promouen la metàstasi de l'HCC.S'ha estudiat l'expressió de marcadors EMT com la vimentina, el gir, l'enllaç de dit de zinc de la caixa E (ZEB) 1, ZEB2, cargol, llimac i E-cadherina en CTC derivats del fetge de pacients amb HCC.58 El sistema CanPatrol™ desenvolupat per Cheng [61] va classificar els CTC en tres subgrups fenotípics basats en marcadors expressats predominantment: fenotip epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenotip mesenquimal (vimentina, enrotllat) i fenotips mixtes.En 176 pacients, el CTC total va ser superior a l'AFP per diferenciar l'HCC de la malaltia hepàtica benigna.Els valors d'AUC per a CTC total, AFP i CTC total combinat i AFP van ser de 0,774 (IC del 95%, 0,704–0,834), 0,669 (IC del 95%, 0,587–0,750) i 0,821 (IC del 95%, 0,756–0,88). ).), respectivament.La classificació CTC basada en l'EMT pot predir el diagnòstic d'HCC, la recurrència precoç, la metàstasi i el temps global més curt.
Actualment, els mètodes per detectar CSC inclouen mètodes físics i mètodes biològics.Els mètodes físics, sovint anomenats enriquiment basats en propietats biofísiques, depenen principalment de les propietats físiques del CSC, com ara la mida, la densitat, la càrrega, la mobilitat i la deformabilitat.En funció de les propietats físiques, hi ha diferents mètodes com sistemes basats en filtració, dielectroforesi, etc. Aquest últim, també conegut com a enriquiment basat en immunoafinitat, es basa principalment en la unió antigen-anticossos ja que el mètode utilitza anticossos contra biomarcadors específics del tumor. com ara EpCAM, ASGPR, receptor 2 del factor de creixement epidèrmic humà (HER2), antigen específic de la pròstata (PSA), pancitoqueratina humana (P-CK) i carbamoil fosfat sintasa 1 (CPS1).62 Un altre tipus, anomenat mètode sense enriquiment, utilitza citometria de flux per diferenciar els CTC dels leucòcits en funció d'una proporció i una mida més alta entre el nuclear i el citoplasmàtic.Actualment, l'única prova aprovada per la FDA per a la detecció de CTC és el sistema Cell-Search™, que utilitza el marcador de superfície cel·lular EpCAM. Tanmateix, la detecció combinada de CTC basada en marcadors podria augmentar la taxa de positivitat.54 Una barreja d'anticossos contra ASGPR i CPS1 va aconseguir una taxa de detecció de CTC del 91% en pacients amb HCC.63 Zhang et al van utilitzar un CTC-Chip amb anticossos contra ASGPR, P. -CK i CPS1, i va diferenciar els pacients amb HCC dels pacients amb malaltia hepàtica benigna o càncer no HCC a una taxa del 100%.64 Un estudi de Wang va detectar EpCAM+ CTC en el 60% de 42 pacients amb HCC i va trobar correlacions significatives entre ambdues positivitats. Guo et al van trobar que una puntuació de PCR derivada de CTC va ser elevada en 125/171 (73%) pacients el nivell d'AFP dels quals era <20 ng/mL amb una sensibilitat del 72,5% i un especificitat del 95,0%, en comparació amb el 57,0% i el 90,0% per a l'AFP a un tall de 20 ng/ml.66 La combinació d'AFP i CTC pot millorar la detecció d'HCC.45 Es creu que els CTC tenen un avantatge sobre l'AFP en el cribratge precoç dels grups. amb alt risc d'HCC. Tanmateix, la detecció combinada de CTC basada en marcadors podria augmentar la taxa de positivitat.54 Una barreja d'anticossos contra ASGPR i CPS1 va aconseguir una taxa de detecció de CTC del 91% en pacients amb HCC.63 Zhang et al van utilitzar un CTC-Chip amb anticossos contra ASGPR, P. -CK i CPS1, i va diferenciar els pacients amb HCC dels pacients amb malaltia hepàtica benigna o càncer no HCC a una taxa del 100%.64 Un estudi de Wang va detectar EpCAM+ CTC en el 60% de 42 pacients amb HCC i va trobar correlacions significatives entre ambdues positivitats. Guo et al van trobar que una puntuació de PCR derivada de CTC va ser elevada en 125/171 (73%) pacients el nivell d'AFP dels quals era <20 ng/mL amb una sensibilitat del 72,5% i un especificitat del 95,0%, en comparació amb el 57,0% i el 90,0% per a l'AFP a un tall de 20 ng/ml.66 La combinació d'AFP i CTC pot millorar la detecció d'HCC.45 Es creu que els CTC tenen un avantatge sobre l'AFP en el cribratge precoç dels grups. amb alt risc d'HCC.Tanmateix, la detecció combinada de CTC basada en marcadors pot augmentar el percentatge de resultats positius.54 Una barreja d'anticossos anti-ASGPR i CPS1 va aconseguir una taxa de detecció de CTC del 91% en pacients amb HCC.63 Zhang et al.va utilitzar un xip CTC amb anticossos contra ASGPR, P-CK i CPS1, i també va distingir els pacients amb HCC d'aquells amb malaltia hepàtica benigna o no HCC a una taxa del 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. freqüència i nombre de CTC amb estadi TNM.65 Guo et al van trobar que la PCR derivada dels CTC estava elevada en 125/171 (73%) pacients que tenien nivells d'AFP <20 ng/mL amb una sensibilitat del 72,5% i una especificitat de 95,0% en comparació amb el 57,0% i el 90,0% de l'AFP a un nivell de tall de 20 ng/ml.66 La combinació d'AFP i CTC pot millorar la detecció d'HCC.45 Es considera que els CTC tenen un avantatge respecte a l'AFP en el cribratge precoç. grups.amb un alt risc d'HCC.Tanmateix, la detecció combinada de CTC basada en marcadors pot augmentar el percentatge de resultats positius.54 Una barreja d'anticossos anti-ASGPR i CPS1 va aconseguir una taxa de detecció de CTC del 91% en pacients amb HCC.63 Zhang et al.van utilitzar xips CTC amb anticossos contra ASGPR, P-CK i CPS1 i van distingir pacients amb HCC de malaltia hepàtica benigna i no HCC amb un 100%.64 L'estudi de Wang va identificar el 60% dels CTC EpCAM+ en 42 pacients amb HCC i va trobar una correlació significativa entre la incidència i el nombre de CTC en l'etapa TNM. 65 Guo 等 人 发现 , 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 , ctc 衍生 的 pcr 评分 升高 , 为 为 72,5%, 特异性 为 为 为 为 为 95,0%, 而 在 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 , , ctc 衍生 pcr 评分 , 敏感性 为 为 72,5%, 为 95,0%, afp 在 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 截止值 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. va trobar que en 125/171 (73%) pacients amb nivells d'AFP <20 ng/mL, els valors de PCR derivats de CTC es van elevar amb una sensibilitat del 72,5% i una especificitat del 95,0%, mentre que l'AFP estava a l'especificitat de tall. era de 20 ng/ml.ml va ser del 57,0% i del 90,0%.66 La combinació d'ORP i CTC millora la detecció d'HCC.Es creu que els CTC 45 són superiors a l'AFP en el cribratge precoç de poblacions d'HCC d'alt risc.Per tant, per als grups d'HCC positius per CTC i d'alt risc, les proves de CTC s'han de combinar rutinàriament amb la detecció d'ecografia i AFP.Tanmateix, els CTC es consideren predictors importants de metàstasi i recurrència del tumor, i la detecció de CTC no es recomana de manera independent com a eina de diagnòstic.62 Per tant, el CTC pot servir com a millor biomarcador predictiu que altres marcadors utilitzats actualment. Zhou et al van trobar que els pacients amb un nombre elevat de CTC EpCAM + i cèl·lules T reguladores mostraven un risc més elevat de desenvolupar recurrència de l'HCC, que aquells amb un nombre baix de CTC, amb una ràtio de recurrència del 66,7% enfront del 10,3% (P <0,001).67 Un estudi similar va ser reportat per Zhong et al.68 A més, Qi va trobar que 101 de 112 pacients (90,81%) amb HCC, inclosos aquells amb malaltia en fase inicial, eren positius per a CTC i que es van detectar nòduls d'HCC molt petits després de 3 anys. a 5 mesos de seguiment. Zhou et al van trobar que els pacients amb un nombre elevat de CTC EpCAM+ i cèl·lules T reguladores mostraven un risc més elevat de desenvolupar recurrència de HCC que aquells amb un nombre baix de CTC, amb una ràtio de recurrència del 66,7% enfront del 10,3% (P <0,001).67 A estudi similar va ser reportat per Zhong et al.68 A més, Qi va trobar que 101 de 112 pacients (90,81%) amb HCC, inclosos aquells amb malaltia en fase inicial, eren positius per a CTC i que es van detectar nòduls d'HCC molt petits després de 3 a 5 mesos de seguiment. Чжоу i др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al van trobar que els pacients amb CTC EpCAM + elevats i cèl·lules T reguladores tenien un risc més gran de recurrència d'HCC que aquells amb CTC baixos, amb una taxa de recurrència del 66,7% enfront del 10,3% (P<0,001)67.Un estudi similar va ser realitzat per Zhong et al.68. A més, Qi va trobar que 101 de 112 pacients (90,81%) amb HCC, inclosos els que tenien una malaltia precoç, tenien CTC i que es van detectar nòduls d'HCC molt petits després de 3 a 5 mesos de seguiment. Zhou 等 人 发现 , 与 ctc 数量 较 少 的 相比 , , epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 升高 的 患者 发生 hcc 复发 的 更 高 , 复发率 分别 为 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 与 ctc 数量 少 的 患者 , , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 , , 复发率 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу i др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.va trobar que els pacients amb CTC EpCAM + elevats i cèl·lules T reguladores tenien un risc més elevat de recurrència de l'HCC en comparació amb els pacients amb menys CTC, amb taxes de recurrència del 66,7% i del 10,3%, respectivament (P <0,001).Un estudi similar va ser informat per Zhong et al.68 A més, Qi va trobar que 101 de 112 pacients amb HCC (90,81%), inclosos pacients amb malaltia precoç, tenien resultats CTC positius i van trobar nòduls d'HCC molt petits després de 3 visites.Observació fins a 5 mesos.També van trobar CTC en 12 pacients amb infecció crònica per VHB i van trobar petits tumors d'HCC en 5 mesos en 2 pacients positius amb CTC.69 Així, els CTC es poden utilitzar per predir l'HCC, 70 però es poden utilitzar de manera més rutinària com a biomarcadors predictius.
Igual que el cfDNA, el cfRNA s'allibera al torrent sanguini a través de diversos sistemes.Aquestes molècules de la sang perifèrica representen el teixit cancerós d'origen.En comparació amb els marcadors detectats per mètodes no invasius, els cfRNAs estan regulats de manera més dinàmica, específics del teixit i abundants a l'entorn extracel·lular.La importància i el valor diagnòstic de 71 miRNAs (miRNAs) en HCC s'han informat en molts estudis.Els miRNA són ARN endògens no codificants (ARNnc) que regulen diverses activitats biològiques moleculars inhibint la traducció dels ARN missatgers diana (ARNm).Els miRNA es troben en cossos apoptòtics encapsulats en exosomes, però també es poden unir de manera estable a proteïnes sèriques i lípids de la sang perifèrica i es poden utilitzar per avaluar l'HCC.Els microARN estan implicats en la regeneració del fetge, el metabolisme dels lípids, l'apoptosi, la inflamació i el desenvolupament de l'HCC.72 Els miRNAs oncogènics com miR-21, miR-155 i miR-221 són ben coneguts a l'HCC.En particular, miR-21 té un paper clau en la síntesi de col·lagen a la matriu extracel·lular i la fibrosi i promou l'hepatocarcinogènesi mitjançant l'activació de cèl·lules mare hematopoètiques.72,73 Els miRNA supressors de tumors en HCC inclouen miRNA-122, miRNA-29, la família Let-7 i la família miRNA-15.La família Let-7 consta de molts miRNAs supressors de tumors que tenen com a objectiu la família RAS.La família miR-15 inclou miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 i miR-497, que tenen seqüències complementàries per a determinats ARNm.A més, els ARN llargs no codificants (lncRNAs) i els ARN circulars (cirRNAs) també són importants per al cribratge precoç de l'HCC.Els ARNnc representen la classe més àmplia d'ARNnc, inclosos els ARNnc semblants a l'ARNm, i estan implicats en la patogènesi de moltes malalties humanes.Els LncRNA tenen un paper regulador en el microambient hepàtic i la malaltia hepàtica crònica.74 Els ARNc també són una classe d'ARNnc amb múltiples funcions en la regulació de l'expressió gènica.Recentment, els circRNAs s'han considerat com a eines de diagnòstic per a HCC.
L'ARN lliure circulant té una estabilitat notable, inclosa la resistència a la temperatura, el pH i la RNasa, cosa que fa que l'aïllament de l'ARNfn de la sang perifèrica sigui menys tediós mitjançant mètodes estàndard de purificació d'ARN.Els mètodes més utilitzats inclouen NGS, microarray i RT-qPCR.NGS permet mesurar els microARN a tot el genoma.Tanmateix, aquest mètode és car i l'anàlisi no està estandarditzada.En canvi, la RT-qPCR és barata, amplifica ràpidament els àcids nucleics i ofereix molts avantatges com ara una major sensibilitat, una major precisió, un rang dinàmic més ampli i que requereixen menys mostres.Els microarrays són un altre mètode utilitzat per a la detecció de miRNA basat en la hibridació sensible i específica de miRNA objectiu amb sondes d'ADN complementàries, 75 però l'anàlisi de les dades de microarrays requereix molt de temps.
S'ha informat que la circulació de miR-122 i Let-7 és potencialment útil en el diagnòstic d'HCC en fase inicial en grups d'alt risc, marcadors en pacients amb nòduls premaligns associats al VHB i HCC en fase inicial.76 Cai et al.va trobar que els membres de la família Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 i miR-199a/b) corren el risc de patir una malaltia crònica. HCC en pacients amb hepatitis.La família Let-7 pot servir com a biomarcador substitut eficaç per predir el desenvolupament d'HCC en grups d'alt risc associats a l'hepatitis C crònica. 77 miR-122 té una alta precisió diagnòstica per detectar HCC precoç en pacients amb cirrosi hepàtica.78 El sèrum circulant MiR-107 també s'ha avaluat en les primeres etapes del CHC, 79 i ha mostrat un bon potencial en poblacions d'alt risc.Zhou et al van informar que un panell de miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a i miR-801) pot diferenciar l'HCC de l'hepatitis B crònica (CHB) i la cirrosi. la sensibilitat va ser del 79,1% i del 75%, i l'especificitat del 76,4% i del 91,1%, respectivament.80 En l'HCC relacionat amb el VHB, vam trobar que els nivells de miR150 es van reduir significativament en comparació amb els dels pacients crònics amb VHB sense HCC (sensibilitat 79,1%, especificitat 76,5%).-224 va ser elevat en l'HCC en comparació amb els controls sans, i les anàlisis de subgrups van mostrar nivells més alts en pacients amb HCC associats al VHB.Els pacients amb cirrosi associada a l'hepatitis B i HCC van identificar un classificador de siRNA que contenia set siRNAs expressats de manera diferent que poden detectar HCC en diferents controls;El rang AUC a la detecció primerenca és millor que els voluntaris de l'AFP.Van trobar que quatre miRNAs (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p i miR-365a-3p) podrien distingir els pacients amb HCC dels pacients sense HCC.Cinc miRNAs sobreexpressants (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p i miR-148a-3p) es consideren possibles infeccions per VHB en biomarcadors de HCC, cirrosi i CHB, especialment. miR-34a-5p poden ser biomarcadors de la cirrosi hepàtica,85 i poden ser biomarcadors potencials per al cribratge precoç de l'HCC en poblacions d'alt risc.El lncRNA més estudiat en l'HCC està altament activat en el càncer de fetge (HULC).Altres estudis han demostrat que HULC que circula en pacients amb HCC es pot utilitzar com a marcador diagnòstic perquè aquest lncRNA està molt regulat en pacients amb HCC en comparació amb individus sans.71,86 Entre altres lnRNAs, LINC00152 es considera el millor lncRNA diagnòstic a causa de la seva elevada AUC, sensibilitat i especificitat.86 En un estudi, l'expressió de la sang perifèrica de LINC00152 va augmentar gradualment des dels controls sans normals fins als pacients amb CHB i cirrosi, i finalment va ser més alta en HCC.Els estudis sobre l'expressió de circSMARCA5 en el plasma de pacients amb HCC han mostrat una disminució progressiva de l'expressió de l'HCC que va des de l'hepatitis fins a la cirrosi i les lesions precanceroses.87 L'anàlisi de les corbes ROC va confirmar el potencial d'aquests circRNAs per distingir els pacients amb hepatitis o cirrosi hepàtica dels pacients amb HCC, especialment aquells amb nivells d'AFP per sota de 200 ng/mL.A més, Zhu va analitzar 13.617 ARN cíclics en mostres de plasma de pacients amb HCC associats al VHB i va confirmar que 6 ARN cíclics s'expressaven de manera diferent en l'HCC i la cirrosi associada al VHB, cosa que suggereix que els ARNc poden ser beneficiosos.marcadors per a la detecció precoç de grups d'alt risc com els associats amb malalties hepàtiques, pacients amb esclerosi.88
Els exosomes són vesícules de membrana de 40–160 nm de diàmetre;múltiples vesícules intracel·lulars es fusionen amb la membrana cel·lular i s'alliberen a la matriu extracel·lular.Contenen molts components actius, inclosos lípids, proteïnes, ARN i ADN, i tenen un paper clau en la comunicació entre cèl·lules, tant cèl·lules HCC com no HCC.89,90 Els exosomes regulen la progressió de l'HCC activant els fibroblasts d'hepatòcits i les cèl·lules estelades, les cèl·lules immunitàries, els hepatòcits normals i les cèl·lules HCC.91 En el microambient tumoral, les cèl·lules tumorals produeixen un gran nombre d'exosomes que es transporten de les cèl·lules canceroses a les cèl·lules immadures, que al seu torn estan implicades en l'oncogènesi, la degradació i la senyalització cel·lular.92 Els estudis han demostrat que els exosomes poden transferir oncogens a cèl·lules normals durant processos patològics, que poden ser un dels mecanismes d'invasió tumoral i metàstasi.93 El paper dels exosomes en la progressió del càncer pot ser dinàmic i específic del tipus de càncer, 89 Els exosomes poden ser interioritzats per cèl·lules adjacents o llunyanes per regular múltiples gens diana a les cèl·lules receptores que poden estar implicats en ions de comunicació intercel·lular i interaccions del microambient cel·lular, poden mediar la senyalització cel·lular i el metabolisme.94 Les característiques i els canvis dinàmics de les molècules de càrrega d'exosomes reflecteixen directament les característiques i els canvis dinàmics de les cèl·lules tumorals parentals,95 que també és la base per a l'ús dels exosomes en el diagnòstic i el pronòstic del càncer, així com per predir la resposta individual a la teràpia anticancerígena. ..96
Els mètodes tradicionals de laboratori per aïllar i analitzar exosomes són complexos, de diversos passos i requereixen temps, com ara ultracentrifugació, filtració, cromatografia d'exclusió de mida, purificació d'immunoafinitat, Western blotting, assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA), PCR i anàlisi de flux.Els sistemes miniaturitzats i les plataformes de laboratori en un xip que utilitzen micro/nanotecnologia s'estan desenvolupant àmpliament per a un aïllament in situ ràpid i còmode d'exosomes.L'anàlisi de seguiment de nanopartícules (NTA) és un mètode àmpliament utilitzat per caracteritzar la mida i la concentració d'exosomes, incloent mètodes com les nanopartícules magnètiques i els polihidroxialcanoats.Els mètodes microfluídics i electroquímics també poden detectar ràpidament exosomes amb alts rendiments.
Les proteïnes exosomals són marcadors importants per al diagnòstic d'HCC.A l'estudi d'Arbelaiz, el nivell de proteïna d'unió SH3 RasGAP 98 (G3BP) i el receptor d'immunoglobulina polimèrica (PIGR) es va elevar significativament en els exosomes derivats de l'HCC, i l'eficàcia combinada putativa de les dues proteïnes va ser superior a la de l'AFP.La sobrecàrrega de ferro és un factor important que contribueix al desenvolupament de l'HCC.Tseng va informar que l'hepcidina pot tenir un paper clau en la resistència a l'HCC.99 Els exosomes derivats del sèrum de pacients amb HCC tenien un nombre de còpies significativament més alt de variants d'ARNm d'hepcidina que els seus homòlegs sans, cosa que suggereix que l'hepcidina pot ser un biomarcador de diagnòstic nou per a HCC.La proteïna 14-3-3ζ dels exosomes produïda per 100 HCC pot reduir l'activació, la proliferació i la diferenciació de cèl·lules T i pot induir la transformació de cèl·lules T en cèl·lules T reguladores, donant lloc a l'esgotament de les cèl·lules T.101 Això està recolzat per diversos estudis que investiguen l'evasió del tumor de la vigilància immune, 102 que poden contribuir a la tumorigènesi de l'HCC.
A més de la presència d'ecRNA al plasma o sèrum, els exosomes enriquits amb ARN es poden utilitzar per a l'estadificació no invasiva en temps real en el cribratge precoç del tumor i per determinar l'evolució del tumor i la resposta a la teràpia.El nivell de miRNA-21 exosomal en el sèrum sanguini en el grup HCC va ser 2,21 vegades més gran que en el grup CHB, i en el grup HCC va ser 5,57 vegades més gran que en la població sana.A l'estudi de Wang, els exosomes van augmentar significativament l'HCC en comparació amb els pacients cirròtics amb valors d'AUC de 0,83 (IC del 95% 0,74-0,93) i 0,94 (IC del 95% 0,88-1,00).104 Les dades obtingudes van dilucidar la implicació de molècules específiques de càrrega exosomal en la regulació de l'oncogènesi i la progressió de l'HCC.105 L'expressió sèrica de miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 i miR-26a és consistent.i metàstasi, i els nivells de miR21 eren molt més alts en pacients amb HCC que en controls sans i també en pacients amb CHB.102 LncRNA tenia un valor diagnòstic potencial en HCC.Els estudis han demostrat que els exosomes derivats del sèrum de pacients amb HCC tenen nivells significativament més alts de LINC00161, LINC000635 i lncRNA activats mitjançant la transformació del factor de creixement-β que en pacients sense HCC, i aquests lncRNAs estan fortament associats amb l'estadi TNM i el volum del tumor.110 Conigliaro et al.Es va trobar que els exosomes CD90 + expressaven nivells elevats de lncRNAH19, que van augmentar significativament l'alliberament del factor de creixement endotelial vascular (VEGF) i la producció del receptor VEGF-R1, estimulant així l'angiogènesi.93 Els ARNc circ són un altre tipus d'ARNnc exosomal: expressats a nivells més baixos però estables entre espècies, els ARNcr també mostren especificitat pel tipus de cèl·lula, tipus de teixit, fase de desenvolupament i activitat reguladora.Els circRNAs 111 són biomarcadors de diagnòstic per al càncer precoç i mínimament invasiu.112 Assajos clínics recents han demostrat que l'especificitat dels miRNA individuals per predir l'HCC no és ideal.Per tant, la detecció complexa mitjançant múltiples assajos (per exemple, miR-122 i miR-48a en combinació amb AFP) pot millorar la identificació de l'HCC precoç i la diferenciació de l'HCC de la cirrosi.100
Els pacients amb CHB i cirrosi hepàtica són el grup d'alt risc més freqüent de desenvolupar HCC.Per als grups d'alt risc, un cop s'ha aconseguit una resposta virològica sostinguda, s'ha de desenvolupar una estratègia de vigilància rendible basada en el risc d'HCC, i el cribratge precoç és la clau per millorar el diagnòstic i el tractament de l'HCC amb una alta relació cost-efectivitat2. ..Els mètodes de cribratge precoç del càncer tenen moltes limitacions: no s'han desenvolupat mètodes de cribratge precoç efectius per a la majoria dels tipus de càncer i l'adherència sol ser baixa.En comparació amb els mètodes tradicionals de cribratge primerenc, la tecnologia de biòpsia líquida té avantatges evidents: facilitat de mostreig, detecció de panrac, bona reproductibilitat de la mostra i resposta eficaç a l'heterogeneïtat del tumor.Donada la rendibilitat dels mètodes associats a la biòpsia líquida, el seu ús en el cribratge d'HCC no s'ha provat de manera rutinària.Malgrat els avenços en la detecció precisa a nivell molecular, la biòpsia de líquids és costosa per detectar l'HCC en pacients objectiu, limitant el seu ús generalitzat en comparació amb procediments específics d'imatge com ara l'ecografia i la ressonància magnètica.113,114 No obstant això, un estudi anterior va demostrar que la biòpsia líquida mostrava un benefici significatiu en termes d'anys de vida ajustats a la qualitat (QALY).115 També s'han demostrat els beneficis de la biòpsia líquida en el carcinoma precoç d'estómac i nasofaringe.116,117 La visió actual és que la biòpsia líquida pot complementar els biomarcadors sèrics i el cribratge radiològic en la detecció i el diagnòstic de tumors.117 118
Segons la literatura actual, la tecnologia de biòpsia de fluids ha mostrat una sensibilitat i especificitat significativament més elevades en el cribratge precoç de grups d'alt risc de càncer de fetge.Independentment del tipus de biòpsia de líquids, pot distingir l'HCC d'individus d'alt risc sense HCC, cosa que suggereix la importància del cribratge precoç, ja que les diferències entre individus d'alt risc i sans són evidents.L'ADNc té una vida mitjana curta i es pot utilitzar per detectar l'HCC, de manera que qualsevol canvi en l'ADNc derivat del tumor pot proporcionar proves concretes en temps real de la progressió del tumor, especialment per als tumors petits.Un alt nivell d'ADNc indica el desenvolupament i la propagació del càncer i és un indicador primerenc de progressió i recurrència.A més, a partir dels resultats de l'ADNc, els pacients poden rebre un tractament i un seguiment individualitzats.119 Els llocs específics de metilació poden ser un millor marcador que l'AFP per a la identificació precoç d'HCC i nòduls cirròtics.En els casos resecables d'HCC, nivells elevats d'ADNc són indicatius d'invasió microvascular i recurrència postoperatòria i metàstasi.Els canvis en el nombre de còpies estan associats amb la supervivència dels pacients amb HCC.Es pot suposar que l'avaluació de l'ADNc pot estar implicada en el tractament global de l'HCC, i l'ADNc pot servir com a indicador eficaç de la modulació terapèutica.Les guies clíniques han adoptat marcadors basats en mutacions genètiques específiques en l'ADNc per predir l'eficàcia i controlar la resistència als medicaments.Les proves d'ADNc pot ser l'eina de biòpsia líquida més útil per al cribratge precoç.Els CTC també tenen un paper clau en la detecció precoç dels grups d'HCC d'alt risc.Diversos marcadors de CTC associats a HCC són de particular importància en l'aparició, desenvolupament i recurrència de l'HCC.Com a vesícules de membrana, els exosomes estan implicats en les comunicacions intercel·lulars, especialment a les cèl·lules HCC.Els microARN circulants són estables a la sang i, per tant, poden ser més útils per al cribratge precoç de l'HCC.A poc a poc, es van descobrir proteïnes exosomals i exosomes rics en ARN i es va confirmar la seva eficàcia predictiva per a l'HCC.Curiosament, diferents etiologies de l'HCC també poden estar associades a diferents mutacions, de manera que podem seleccionar diferents biomarcadors per a un cribratge precoç en funció de diferents etiologies de l'HCC.120
No obstant això, les tècniques actuals de biòpsia de líquids són qüestionables pel que fa a l'estabilitat i no poden realitzar de forma independent el cribratge o el seguiment precoç de l'HCC, però encara poden complementar el cribratge i el diagnòstic individuals.121 Com a forma de biòpsia líquida, la detecció i la imatge de ctDNA, CTC, cfRNA i AFP associada a exosomes o PIVKA-II tenen aplicacions prometedores en el diagnòstic precoç i el pronòstic de l'HCC.No obstant això, el mecanisme exacte de l'alliberament d'ADNc a la sang encara està per dilucidar.Revelar les propietats biològiques bàsiques de l'ADNc pot facilitar el seu ús com a marcador.La petita quantitat d'ADNc a la circulació i els estrictes requisits de manipulació de mostres són reptes per a la implementació clínica de la detecció d'ADNc en HCC.A més, les mutacions genètiques no tenen característiques específiques que permetin la identificació precisa dels carcinògens.Com que també hi ha múltiples variants genètiques i somàtiques als teixits normals, les mutacions genètiques identificades per biòpsia de líquids poden ser d'utilitat limitada en el cribratge precoç del CHC.122 Les limitacions de les dianes gèniques útils i els biomarcadors ben definits que ajuden a diferenciar l'ADNc de l'ADN no tumoral són els problemes més importants en l'ús de l'ADNc.manca d'utilitat de marcadors sensibles i específics per a la detecció de CTC.Només es van trobar cèl·lules viables amb potencial metastàtic i la combinació òptima de marcadors enriquits amb CSC no estava clara.L'aïllament de CTC per al cultiu i l'avaluació dels seus perfils mutacionals també és una tasca difícil.A causa dels problemes amb la identificació, l'aïllament i la purificació dels exosomes, el mecanisme molecular específic encara no està clar, i els estudis anteriors sobre el mecanisme dels exosomes i l'HCC no s'han aprofundit, i la manera com els miRNAs, lncRNAs i proteïnes s'ordenen en exosomes. , i no està clar si l'absorció d'exosomes és un procés de tipus específic.L'ús d'exosomes per al diagnòstic i tractament de l'HCC encara es troba en l'etapa preclínica.La manca d'estandardització dels procediments de biòpsia líquida, com ara el tipus de tubs utilitzats per recollir sang, volum sanguini, emmagatzematge i detecció de mostres, aïllament i enriquiment, pot impedir el seu ús en la pràctica clínica habitual a causa de les diferències en les pràctiques entre els centres mèdics.L'eficàcia de la biòpsia líquida en el cribratge precoç, el diagnòstic, l'avaluació de l'eficàcia i la predicció de l'HCC encara està per explorar, especialment per als grups d'alt risc.La tecnologia de biòpsia líquida té un gran potencial i s'espera que s'utilitzi àmpliament en la pràctica clínica del càncer de fetge en un futur proper.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Estadístiques mundials de càncer 2020: GLOBOCAN estima la incidència i la mortalitat de 36 tipus de càncer a 185 països.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Seu de la Comissió Nacional de Salut.Criteris per al diagnòstic i tractament del càncer de fetge primari (edició 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Directrius per al diagnòstic i tractament del carcinoma hepatocel·lular (edició 2019).Càncer de fetge.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Directrius de pràctica clínica per al carcinoma hepatocel·lular: Societat japonesa de malalties del fetge, 2017 (4a directrius JSH-HCC), actualització de 2019.Reservori de malalties hepàtiques.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsia líquida en malaltia hepàtica crònica.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biòpsia líquida del càncer de mama: una revisió centrada.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Vigilància del carcinoma hepatocel·lular: millors pràctiques actuals i direccions futures.Gastroenterologia.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Associació Europea de Recerca L, Organització Europea R, C Therapeutics.Guies clíniques EASL-EORTC: tractament del carcinoma hepatocel·lular.J Heparina.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Anàlisi combinada d'AFP i HCCR-1 com a marcadors serològics útils en el carcinoma hepatocel·lular petit: un estudi de cohort prospectiu.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Expressió diferencial del microRNA-125b plasmàtic en la malaltia hepàtica associada al virus de l'hepatitis B i el potencial diagnòstic del carcinoma hepatocel·lular induït pel virus de l'hepatitis B.Reservori de malaltia hepàtica.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologia i importància de l'alfa-fetoproteïna en el carcinoma hepatocel·lular.fetge int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Directrius clíniques per al tractament del carcinoma hepatocel·lular a la regió Àsia-Pacífic: actualització de 2017.Organització Internacional de Malalties Hepàtiques.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Valor diagnòstic del sèrum PIVKA-II sol o en combinació amb AFP en pacients xinesos amb carcinoma hepatocel·lular.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Càncer de pulmó de cèl·lules no petites Biòpsia de líquid humoral no plasmàtic: més a prop del tumor!cel·la.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Biòpsia líquida: estat actual i perspectives de futur.Tractament Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biòpsia líquida del càncer: una eina de diagnòstic multimodal en oncologia clínica.L'Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Àcids nucleics en plasma humà.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Detecció avançada d'ADN tumoral circulant mitjançant anàlisi de la mida del fragment.La ciència tradueix la medicina.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Longitud del fragment d'ADN del tumor circulant.Gens PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. ADN del tumor circulant: un biomarcador prometedor en la biòpsia del càncer basada en líquids.tumor objectiu.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detecció de l'ADN del tumor circulant en les etapes primerenques i tardanes de les malalties humanes.La ciència tradueix la medicina.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biòpsia líquida per a l'anàlisi predictiva mutacional del càncer sòlid: perspectiva d'un patòleg.J Biotecnologia.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Detecció precoç de tumors mitjançant cribratge d'ADN de plasma circulant: bombo o esperança?Dret clínic belga.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Efecte del virus de l'hepatitis i l'envelliment sobre la metilació de l'ADN en l'hepatocarcinogènesi humana.Histopatologia.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647


Hora de publicació: 23-set-2022